基于转录组学和蛋白质组学的高海拔肺动脉高压大鼠模型的新靶标

静脉冷却（PH）是指静息时平均静脉压≥25 mmHg。 它根据血扩散力习特质、肺癌系统和病理习分为五类。 第三类高海拨静脉冷却（HAPH）是由于在高海拨栓塞生态环境里面肺换气量代偿性增加和肺小动脉血管收缩引来的，导致高原心肌病。 临床症状还包括运动性晕眩、痉挛和松弛。 HAPH 或许凸显了没法适应高海拨，并伴有不清楚的病理生理系统。 大约有 1.4 亿人生活在海拨 2,500 米以上的海地区，每年有超过 4,000 万人访问这些高海拨海地区。 栓塞导致循环系统突变表达出来谱引发差异变化； 这是从长时间居住在高海拨海地区的当地人及其后代的突变型优点变化里面得知的。HAPH 的外科手术仍在学术研究里面。应要求患者移至低海拨海地区，氧疗有效地。本品外科手术的学术研究仅限于一些随机试验。 HAPH 的病理与其他多种类型的 PH 相似，因此世人考虑对 PAH 有效地的本品应该对 HAPH 有效地。

然而，所有这些凋亡本品都在HAPH里面的有效地性和系统尚不清楚。为明白决这个解决办法，我们宗旨学术研究栓塞所涉及的分子可系统，可用果蝇 HAPH 三维，并应用综合除此以外习方法。 在此每一次里面，我们宗旨学术研究几种凋亡本品和复氧的效用，以确定高海拨引来的栓塞的潜在取而代之外科手术靶点。 特别是，我们学术研究了凋亡本品如何制约循环系统之间的差异突变和RNA表达出来。

学术研究的设计：

将果蝇置于 10% O2（栓塞）一楼里面 3 周以产生 PH。对照果蝇（C 组）在整个实验里面都正处于常氧生态环境下，并在外科手术期间（即从第 21 天开始）用载体开展外科手术。 3周时，其余果蝇随机分为六组；一个大被诛杀（第 21 天）以评估心肺系统。其余 5 组用凋亡本品或复氧外科手术，从第 21 天到第 35 天诛杀。慢性栓塞，载体处理（M）；慢性栓塞，司来帕格外科手术；慢性栓塞，劳森替坦外科手术；慢性栓塞，riociguat 外科手术；慢性栓塞、复氧 (RE)。

mRNA组归纳：

提取总 RNA，并通过可用 Arraystar rRNA Removal Kit 去除 rRNA 来富含 mRNA 和非解码 RNA。 mRNA 和非解码 RNA 被片段化缓冲液分解成电影段（~200-500 nt）。以电影段为COM，依靠随机六聚体引物小分子可第一链cDNA。在第二链小分子可每一次里面，dTTP 被 dUTP 引入。 然后重新加入洗脱缓冲液以通过末端重建和替换成甘氨酸来提纯和分离电影段。 电影段被提纯并与接点连接； 可用尿嘧啶-N-内源性酶磨碎第二条链。 琼脂糖凝胶电泳后，选择合适的片段作为COM开展PCR缩减。 可用 Agilent 2100 生物归纳仪和 ABI StepOnePlus 实时 PCR 系统对样品库开展定量和密度评估。 该文库可用 Illumina HiSeq 2000 系统开展人类基因组计划。

LC-MS/MS 归纳

在连接到 Easy-nLC 1000 液相色谱系统的Q Exactive HF 光度计上归纳样品。将湿的肽样品重取而代之溶解在溶剂 A（0.1% 吡啶水溶液）里面并加载到捕集柱里面可用溶剂 A 的第二大负面影响为 280 bar，然后在制做的 150 μm × 30 cm 硅胶微柱上以 5–35% 的梯度开展分离扩散相 B（乙腈和 0.1% 吡啶），流速为 600 nl/min，接下来 150 分钟。 QE HF 的 MS 归纳是在 3e6 离子的自动增益控制目标下开展一次全读取，然后开展多达 30 次与资料相关的 MS/MS 读取具有更高能量的断裂解离，在 Orbitrap 里面检测到（R = 15,000 在 200 m/z）。

学术研究结果：

基于RNA-seq资料的共表达出来网络的系统富含归纳和交通枢纽分子可检验。

基于RNA资料的共表达出来网络的系统富含归纳和交通枢纽分子可检验。

RNA-seq 和RNA组习揭示了对三种本品的反应之间的强相关性，具有几乎相同的效果。GO 富含显示差异表达出来的突变还包括积极参与代谢调节、mRNA和翻译的突变。

司来帕格、劳森替坦和复氧可改善 HAPH。Serpina1、Cryz 和 Cmc1 被检验出来，通过除此以外习配对，作为积极参与HAPH的更为重要突变。这些发现为 HAPH 的凋亡本品系统提供了取而代之的论述。

学术研究论断：

Selexipag、macitentan 和复氧显着减弱了果蝇 HAPH 三维，而 riociguat 的效用过强。 差异表达出来的突变积极参与代谢调控、mRNA和翻译。 某些RNA受到 HAPH 和外科手术的制约。 我们可用除此以外习方法配对了更为重要突变 Serpina1、Cryz 和 Cmc1。 这些发现或许有助于更好地明白栓塞所涉及的分子可系统，并或许提供取而代之的外科手术靶点。

文献引自：

Xu X, Li H, Wei Q, Li X, Shen Y, Guo G, Chen Y, He K, Liu C. Novel Targets in a High-Altitude Pulmonary Hypertension Rat Model Based on RNA-seq and Proteomics. Front Med (Lausanne). 2021 Nov 3;8:742436. doi: 10.3389/fmed.2021.742436. PMID: 34805208; PMCID: PMC8595261.